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重组颗粒细胞剥离液

  )之前,需要从卵母细胞中除去卵丘和颗粒细胞,使得卵母细胞透明带表面,以便微型工具容易进行夹持和注射处理。将卵母细胞团块短时于重组颗粒细胞剥离液中,可以水解将卵丘细胞和颗粒细胞粘连在一起的透明质酸,如果用比卵母细胞直径略大的细孔移液管吹打细胞团,有助于细胞的脱落。

  透明质酸酶是在大多数哺乳动物的顶体中高浓度存在的酶。它可以降解透明质酸(即组成保持卵丘细胞的细胞外基质的粘多糖)的己糖胺键。本产品采用的原料为安全性比较高且不含任何生物病原体的重组透明质酸酶(瑞柏生物专利名称为:重组人颗粒细胞酶)。

  重组透明质酸酶、重组人血清白蛋白、氯化钠、氯化钾、七水合硫酸镁、二水合氯化钙、碳酸氢钠、丙酮酸钠、乳酸钙、葡萄糖、磷酸二氢钾、HEPES、酚红、庆大霉素硫酸盐、无菌水

  单细胞鼠胚测试(MEA),单细胞发育到囊胚期的百分率≥80%(96小时)。

  卵母细胞-卵丘复合物(OCCs)置于一滴用培养油覆盖的重组颗粒细胞剥离液(100-150 μL)组织培养皿(100-200μL)中。30至45秒后,用细孔玻璃移液管吹打OCCs,使弱化的颗粒细胞团松开,获得带有放射冠的卵母细胞。然后将卵母细胞转移至含有100-150 μL含重组人血清白蛋白rHSA(5 mg/mL)的HEPES培养基液滴中,并使用窄口玻璃移液管轻轻吹打以除去冠状放射细胞。(注意:用于从颗粒细胞团中剥离卵母细胞的移液管内径应在250至300 μm之间。用于去除内层放射冠细胞的移液管内径应在135-150 μm之间。)然后再用一系列(4-5个)100-150 μL含有rHSA(5 mg/mL)的HEPES培养基液滴进一步洗涤卵母细胞,以除去过量的重组透明质酸酶和已分离的卵丘细胞。此时,卵母细胞即可以进行ICSI操作。

  注意:与人源或动物源的血清白蛋白(HSA)相比,重组的人血清白蛋白(rHSA)(医用级,内毒素0.01 EU/mg)无任何人源性病原体,可为多功能培养基提供优异的蛋白质来源。

  胚胎是一个通用词语。准确来说,RBC认为胚胎是从受精卵(单个二倍体细胞)融合父母双方的基因信息开始的,随后受精卵进行重复有丝形成致密的桑椹胚(一般第4-5天),之后腔内充满液体形成囊胚(一般第5-6天),直至胚胎植入(从受孕后第一周末开始至第二周末完成)结束。

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